1、聚乙二醇修饰水蛭素与其活性检测
对蛋白质氨基测定方法三硝基苯磺酸法(TNBS)和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行了改进,并用改进后的分析方法对活化的单甲氧基聚乙二醇(mPEG)修饰水蛭素(Hirudin)的反应条件进行了优化,得到了氨基修饰率较高的产物,然后对产物进行了初步分离,并对分离产物的生物活性进行了检测,最后对氧化可溶性淀粉和肝素修饰水蛭素做了一些探索性工作.分析实验结果表明:TNBS反应控制在适当的反应时间内可以得到准确的结果;SDS-PAGE采用BaCl2和I2对mPEG染色比考马斯亮蓝染色水蛭素更为灵敏,特异性也很高.活化mPEG修饰水蛭素......................共62页
2、新型重组双功能水蛭素结构与功能关系的研究
所研究的新型重组双功能水蛭素，由66个氨基酸残基组成，相对分子量约为7kD。样品是通过重组DNA技术将精氨酸—甘氨酸—天冬氨酸(RGD)序列融合在野生水蛭素的合理部位，经过表达和纯化后得到的高纯度重组水蛭素蛋白质。经活性实验证明它具有抗凝血酶和抗血小板集聚的双重功能。测定了重组双功能水蛭素溶液的傅里叶红外光谱，拉曼光谱和圆二色谱，分析并确定了该蛋白质二级结构组成，通过使用Lorentzian曲线对红外光谱的酰胺Ⅰ’带进行分峰拟合，以与使用CONTIN程序应用峰回归算法分析圆二色谱，得到蛋白质中各二级结构的相对含量：无规卷曲结构大约为......................共48页
3、中药水蛭的提取工艺、质量控制与药理研究
对传统活血化瘀中药水蛭的抗凝血活性部位进行了提取、分离和纯化。建立了水蛭提取液蛋白含量测定与抗凝活性测定的质控方法。以水蛭提取液中蛋白质含量与活化部分凝血活酶时间(APTT)为指标分别考察药材在不同溶媒、温度、提取时间、溶媒倍量与提取次数条件下的提取效果。在此基础上对水蛭提取物的抗结石、抗纤维化的药理作用进行了初步研究。初步建立了在60℃条件下，采用10倍于药材重量的4﹪NaCl水溶液分3次提取药材6h(3h+2h+1h)，作为干品宽体金线蛭的提取工艺。采用10倍于药材重量的4﹪NaCl水溶液，在30℃条件下分3次提取药材6h(3h+2h+1h)，作为活体蛭的最佳提取......................共56页
4、菲牛蛭养殖生态学/生化成分与其抗凝活性研究
菲牛蛭隶属无吻蛭目，是一种珍贵的医用水蛭。主要对我国华南地区菲牛蛭养殖生态学、生化成分及其抗凝血酶活性进行了研究。在菲牛蛭繁育过程中，密度、季节、温度、体重、年龄和应激刺激等因素能对菲牛蛭亲本的性腺发育和繁殖效率产生重要影响。研究了上述6个因子对亲蛭繁殖的影响。在季节和密度实验中，分为秋冬和春夏2个季节，分别设置4个(5、20、30和50尾/箱(0.05m3土层))和7个密度梯度(5、10、15、20、25、30和50尾/箱(0.05m3土层))；结果表明在不同季节下，产茧率、产茧数、孵化率和孵化数等繁殖指标有明显差异，其中，春夏季节孵化时间短于秋冬季节，而产茧数和孵化数高于秋冬季节；当繁殖密度为5-10尾/箱时，亲蛭的繁殖效率最高，当繁殖密度为50尾/箱时.....................共65页
5、广西菲牛蛭中菲牛蛭素的分离纯化及体内外抗凝血实验
本研究旨在从广西菲牛蛭中分离纯化菲牛蛭素(Bufrudin)，并对其物理、生化性质及体内外抗凝作用进行研究，用30﹪硫酸铵分步沉淀、离子交换、凝胶过滤和高效液相色谱法分离纯化广西菲牛蛭消化液中的菲牛蛭素，用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其蛋白分子量，等电聚焦法测定等电点，并测定活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)以及对凝血因子的影响，结果表明，广西菲牛蛭中的抗凝物质BDA、BDB均有很强的抗凝活性.....................共65页
6、活体诱导高效提取水蛭素工艺的研究
本项研究对比三种传统提取水蛭素的方法，采用仿生法刺激活体水蛭使其分泌出唾液，瞬间收集水蛭唾液，然后应用超滤对唾液进行高效快速膜分离纯化，再经离子交换和凝胶过滤层析中间纯化，最后应用高效液相进一步纯化得到高纯度的水蛭素，达到多次高效提取水蛭素的目的。其中传统提取水蛭素的方法采用硫酸铵沉淀法、PH值沉淀法、有机沉淀法；活体诱导采用猪血+田螺联合诱导的方式诱导出水蛭唾液，然后再收集水蛭唾液。粗级分离比较了PH值沉淀法、硫酸铵沉淀法、有机沉淀法及超滤膜分离法。DEAE-纤维素离子交换层析用0.05mol/L，pH6.0磷酸盐缓冲液平衡，0-1.0mol/LNacl梯度洗脱，流速30mL/h，进样量为100ml。所得到的水蛭素溶液蛋.....................共65页
7、人工养殖菲牛蛭抗凝血活性物质含量动态变化
主要研究了在人工养殖条件下，不同时期的菲牛蛭体内抗凝血物质含量的动态变化情况，同时优化了菲牛蛭活体、干体、唾液腺分泌物中的抗凝血活性物质的提取方法和检测方法。1.由于菲牛蛭抗凝血活性物质提取方法的多样性，我们选择了一些具有代表性的方法(蒸馏水直接提取、有机溶剂去除杂质蛋白、盐析等方法)进行提取以体外抗凝血活性为指标，通过定性(凝血酶直接滴定法)和定量(ChromonymTH为生色底物的比色法)的方法检测后，选定了最适合提取抗凝血活性物质的方法。同时优化了提取工艺和检测方法。2.人工养殖条件下，由于菲牛蛭取食机会比较多，所以菲牛蛭的生长动态曲线，类似于连续生长动态曲线。在不同的养殖时期，随着菲牛蛭年龄的增加，每条菲牛蛭体内的抗凝血物质含量逐渐增加，但增长速度比菲牛蛭体重增加速度要低，因此单位质量菲.....................共140页
8、天然水蛭素分离纯化的研究
水蛭素是水蛭唾液腺分泌物中所含的一种蛋白质，是迄今世界上已发现的最强的凝血酶特效抑制剂，是一类很有前途的抗凝化瘀药物。世界各地科学家都在研究水蛭素，有很多关于水蛭素的报道和专利，但以前人们关于水蛭素提取的报道大多数都要杀死整条水蛭来获得水蛭素，本实验以南宁科康生物有限公司养殖的菲牛蛭的提取物为原料，将其分离纯化条件进行优化，以获得活性更高的水蛭素产物。首先是比较了硫酸铵分级沉淀盐析法、有机溶剂沉淀法和pH沉淀法三种蛋白质沉淀法对水蛭素分离纯化的效果，确定了利用硫酸铵分级沉淀盐析对水蛭唾液分泌物进行粗分离纯化，通过多次离心分段盐析和两次离心分段盐析效果表明：35％～55％饱和度的(NH4)2SO4(Wa)是较理想的盐析范围，确.....................共57页.
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9、来源于马尼拉水蛭透明质酸酶,分离/纯化和重组生产方法
10、用于由大肠杆菌向培养基中分泌来制备Leu－水蛭素信号序列
11、一种新型双功能水蛭素与其制备方法和应用
12、用酵母分泌表达重组水蛭素
13、新型分泌表达载体与其在重组水蛭素表达技术中应用
14、水蛭素口服缓(控)释剂型
15、重组水蛭素口服肠溶缓释制剂
16、高效表达重组水蛭素与其生产方法
17、一种水蛭提取物与其生产方法和用途
18、人工水蛭蛋白酶抑素与其编码基因与该基因高效表达方法
19、水蛭溶栓软胶囊与其制备方法
20、用水蛭制备治疗脑出血口服液与其配制方法
21、水蛭素突变体一种编码基因与高效表达菌株
22、菲牛蛭养殖方法与水蛭素提取技术
23、酶性止血剂拮抗水蛭素出血作用用途
24、蛇粉和水蛭粉组合物与制备方法
25、重组水蛭素新用途
26、水蛭提取物美容化妆品与其制备方法
27、水蛭蛋白酶抑素在化妆品中应用
28、复方水蛭滴眼液制备与工艺
29、水蛭胶囊
30、用于由大肠杆菌向培养基中分泌来制备Leu-水蛭素信号序列
31、一种水蛭素冻干粉针制剂与其制备方法
32、天然水蛭素复方药用保健品
33、一种以水蛭粉为单一活性成分活血通脉薄膜包衣片剂
34、一种含有三七/瓜蒌皮/水蛭治疗心血管疾病中药制剂与其制备方法
35、活血中药三七和水蛭提取物制备口服软胶囊药物制剂
36、活血中药三七和水蛭提取物制备口服滴丸药物制剂
37、水蛭素抗血栓气雾剂制造技术
38、水蛭提取物美容护肤液与其制备方法
39、一种含有西洋参提取物/水蛭提取物和红花黄色素新药物组合物
40、水蛭素鼻腔给药制剂与其用途
41、一种水蛭多肽冻干粉针制剂与其制备方法
42、以油体蛋白作载体在转基因大豆中生产重组水蛭素方法
43、水蛭素干粉吸入剂与其制备方法
44、一种水蛭指纹图谱建立方法和水蛭药材鉴别方法
45、天然水蛭素软膏
46、天然水蛭素舌下含片
47、一种以吸血水蛭为原料制备水蛭素方法与应用
48、烫水蛭配方颗粒制备方法
49、水蛭素制取方法
50、水蛭素基因hv2－47k及其合成与表达
51、水蛭和 或地龙分子量5800道尔顿以下的提取物
52、一种以水蛭提取物为活性成分中药肠溶口服制剂与其制备方法
53、一种重组双功能水蛭素口服制剂与其制备方法
54、一种水蛭真空冷冻干燥工艺
55、一种治疗心脑血管疾病水蛭微粉制剂与其制备方法
56、一种以菲牛蛭唾液为原材料水蛭素生产工艺
57、一种以菲牛蛭冷冻新鲜体为原材料水蛭素生产工艺
58、一种水蛭真空冷冻干燥方法
59、一种有利于减少水蛭素降解重组毕赤酵母菌株与其构建方法
60、一种水蛭保健药酒与其生产方法
61、一种天然水蛭素有效成分提取方法
62、重组白细胞抑制因子和水蛭原嵌合蛋白与其药物组合物
63、重组水蛭素药物组合
64、一种测定人血浆和 或血清中重组双功能水蛭素方法
65、一种利用阴离子交换柱辅助聚乙二醇修饰水蛭素方法
66、一种水蛭正品与伪品鉴别方法
67、一种重组水蛭素编码基因与应用
68、一种水蛭素口服微球制剂与其制备方法
69、一种水蛭提取物与其制备方法与应用
70、虫草水蛭在制备治疗难治性勃起功能障碍药物上应用
71、一种水蛭活性小肽与其制备方法和用途
72、重组白细胞抑制因子和水蛭原嵌合蛋白与其药物组合物
73、一种中草药水蛭在脑血管病应用与其制备方法
74、水蛭酶解丙酮粉肠溶剂与其制备方法与应用
75、一种饿蚂蟥提取物与其制备方法和应用
76、一种医用吸血水蛭产品制备与新用途
77、一种水蛭素双水相-反胶束提取法
78、水蛭素生理盐水-聚乙二醇双水相提取法
79、一种水蛭与含有水蛭制剂质量控制方法
80、由南美水蛭中提取和纯化抗凝血成分
81、含水蛭素衍生物分泌物
82、水蛭素重组体制备方法
83、医用天然水蛭素提取方法
84、重组水蛭素与其复合物用于制备预防和治疗血栓病药物
85、具有改善稳定性新合成异水蛭素
86、高分子量脱硫水蛭素
87、水蛭素与亲脂化合物水蛭素结合物
88、动物血水蛭水解法与其水蛭水解血
89、用亲合色谱法提纯水蛭素方法
90、用水蛭素和乙酰水杨酸治疗未溶栓急性心肌梗塞病人方法
91、无腥味水蛭粉炮制工艺
92、基于水蛭素氨基酸序列凝血酶抑制剂
93、水蛭素
94、从水蛭干燥全体提取水蛭素的工艺研究
95、反相高效液相色谱法分析聚乙二醇修饰的水蛭素
96、仿生诱导高效提取水蛭素及分离纯化的研究
97、复方水蛭素的药效学研究
98、水蛭的采收与加工
99、水蛭的采收与加工技术
100、水蛭冷冻干燥过程优化及最佳工艺条件的确立
101、水蛭素促尿激酶纤溶作用研究
102、水蛭素的基础研究现状及临床应用展望
103、水蛭素及其重组技术的研究进展
104、水蛭素及重组水蛭素的应用研究概况
105、水蛭素融合蛋白研究进展
106、水蛭提取液中的氨基酸的HPLC测定
107、水蛭有效成分提取工艺的研究
108、新型抗凝药——水蛭素的应用进展
109、重组双功能水蛭素质量标准研究
110、重组水蛭素Ⅲ多克隆抗体的制备
111、重组水蛭素研究进展
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