1、低分子量壳聚糖的制备
利用H2O2的强氧化性制备低分子量分布的壳聚糖是将虾皮用HCl浸泡去除碳酸钙盐;再用稀碱除去蛋白质得甲壳素;然后浓碱在50 ℃与其反应,并控制反应时间,分别制备出脱乙酰度为85%,93%,99%的壳聚糖,最后用H2O2氧化不同脱乙酰化壳聚糖,得到不同低分子量的壳聚糖.其中,脱乙酰度为85%壳聚糖用不同浓度的H2O2降解,得到了4.7×105,3.5×105,2.5×105,1.2×105,8×105等5个不同分子量段的壳聚糖产品.H2O2浓度越大,降解所得壳聚糖的分子量就越小.
2、固定化壳聚糖酶及产酶细胞制备壳低聚糖的研究
对固定化壳聚糖酶以及固定化产酶菌株(Penicillium sp ZD—Z1)降解制备壳低聚糖进行了研究.采用DEAE纤维素为载体,戊二醛为交联剂,对壳聚糖酶的固定化条件、固定化酶的性质进行了研究,确定了交联剂的最佳用量为100mgDEAE纤维素与5ml 5％戊二醛交联,酶与载体的最佳比例为23mg酶/g DEAE纤维素,固定化酶的最适温度和pH分别为60℃和4.0,其米氏常数为18.87g/L;所得固定化酶活力可达1.5U/g、酶活回收率可达81.3％,壳聚糖酶的在经固定化后,最适温度从50℃升高到60℃、最适pH从5.0下降到4.0、米氏常数从2.49g/L升高到18.87g/L,将该固定化酶重复使用十次,酶活力损失小于15％,但是该固定化酶稳定性一般(保存半衰期约为15天).采用六种载体(聚氨酯泡沫、海藻酸钙、海藻酸钙/PAM、海藻酸钙/PVA、PVA、海藻酸钙/PVA
3、光催化和酶法制备低聚壳聚糖的研究
以壳聚糖为原料，通过光催化法和纤维素酶法来研究其降解情况。主要包括以下研究工作：光催化法降解壳聚糖在国内外鲜有报道。本文首次对其进行了详细的探究，实验表明：只有在光催化剂和紫外光照射同时作用下，壳聚糖才能发生光催化降解反应生成低聚壳聚糖。在弱酸性反应体系中，产物的分子量随着催化剂粒径的减少、催化剂用量的增加、紫外光照时间的延长而降低；此外，催化剂的晶型、光源及反应体系的pH值等均有对反应有影响。加入微量的H2O2有利于·OH的形成从而提高光催化降解反应的效果，而过量的H2O2会与壳聚糖在催化剂表面发生竞争，减少·OH的
4、甲壳低聚糖酶法制备工艺优化及生理活性研究
重点探讨了制备甲壳低聚糖的最佳工艺条件,并针对MW10kDa(分子量小于10000道尔顿)甲壳低聚糖的抗氧化、降血糖、降血脂以及吸附重金属等生理活性进行研究。研究结果如下:⑴选用成本低、降解效果好的纤维素酶对壳聚糖进行降解。测定不同酶解时间、酶浓度、pH值、温度条件下的降解效果,通过单因素实验和正交实验得出最佳制备甲壳低聚糖的工艺组合为:酶浓度1600U/g、酶解时间7 h、pH=5.4、温度55℃。以此工艺组合制备MW10kDa甲壳低聚糖得率为69.51%。在影响甲壳低聚糖产率的4个因素中,pH对甲壳低聚糖的产率影响最显著(P0.05),温度则影响最不显著(P0.05)。 ⑵通过甲壳低聚糖对(·OH)和(O2?·)的清除实验看出,甲壳低聚糖浓度为10 mg/ml时,对(·OH)和(O2?·)的清除率均能达到80%左右
5、甲壳废弃物资源化关键酶开发及组合应用研究
随着虾、蟹水产品的大量生产与消费,虾蟹壳废弃物的生成量也日益增大。目前,水产加工行业对虾蟹壳的回收还停留于粗加工和简单利用上。较低的经济效益直接制约了虾蟹壳的资源化利用率。虾蟹壳中含有大量的甲壳素资源,通过深加工获得甲壳素衍生产品,是虾蟹壳废弃物资源化的有效途径。目前,甲壳素衍生物的工业化制备,多为化学处理方法,加工过程消耗大量的酸和碱,造成环境二次污染,且产品品质难以调控。而生物酶法由于其反应条件温和、污染小、产品质量稳定等优点,受到广泛的研究关注。本研究针对甲壳素衍生物酶法生产中所需的三种关键转化酶即甲壳素酶、壳聚糖酶和甲壳素脱乙酰酶进行开发,构建出表达酶的重组菌株,并研究其酶学性质。结果表明,甲壳素酶和壳聚糖酶的最适温
6、甲壳素低聚糖的制备及其生理活性的研究
使用甲壳素非专一性酶纤维素酶和果胶酶水解水溶性甲壳素制备了甲壳素低聚糖，并分析了水解产物的脱乙酰度、聚合度等理化指标，还研究了不同脱乙酰度甲壳低聚糖的抗氧化作用和ACE抑制作用。采用纤维素酶等非专一性酶进行低聚糖的制备，具有水解条件温和，反应过程和产物易于控制等优点，并且使用商品化的非专一性酶使得制备成本大幅下降，现在已被用于壳寡糖的大规模制备。但是目前尚没有采用非专一性酶均相条件下通过降解水溶性甲壳素来制备甲壳素低聚糖的研究报道。本论文使用纤维素酶和果胶酶制备甲壳素低聚糖，以还原糖含量来测定水解程度，确定纤维素酶最佳水解条件为：pH 6.3、55℃、24h，纤维素酶：底物为1：10(w／w)；果胶酶的最佳水解条件为pH 5.1、55℃、36h，果胶酶：底物为1：10(w／w)；同时加入等量纤维素酶和果胶酶的复合酶体系的最佳水解条件为pH 6.0、55℃、12h，复合酶
7、甲壳素酶产生菌的筛选及酶法制备甲壳低聚糖的研究
天然存在的甲壳素结构致密、结晶度高，化学性质稳定，不溶于水、稀碱和稀酸及大部分有机溶剂，很难被水解。本文旨在利用蒸汽爆破、高压均质、辐照等物理方法处理甲壳素，破坏其结晶结构；并从自然界筛选甲壳素酶产生菌，利用其甲壳素酶水解甲壳素制备甲壳低聚糖，尝试解决目前生产甲壳低聚糖过程中污染严重等问题。本论文的主要研究结果如下：从土壤中分离得到一株产甲壳素酶的细菌，经形态学、生理生化及分子生物学鉴定，确定为多粘类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa)，命名为A1。通过发酵条件优化，确定了菌株A1发酵产甲壳素酶条件如下：培养基采用1％甲壳素（120目），0.05%MgSO4·7H2O，1.2%尿素，0.5%NaCl，0.07% K2HPO4，0.03%KH2PO4，0.3%酵母提取粉，初始pH4
8、甲壳素脱乙酰酶的活力优化研究
研究用专一性酶即甲壳素脱乙酰酶降解法制备壳聚糖,并且在前人研究的基础上,优化前人通过研究选择的酶,进一步提高酶的活力以及甲壳素的脱乙酰度。先对产甲壳素脱乙酰酶的菌种即构巢曲霉进行斜面培养,观察其菌落形态,然后通过摇瓶液体发酵培养,最后离心提取其上清液得到甲壳素脱乙酰酶。为了提高甲壳素脱乙酰酶的活力,研究各培养条件如培养时间,温度、pH值、碳源(可溶性壳聚糖)浓度、氮源(酵母粉)浓度、金属离子(CO~(2+))浓度和接种量对酶活的影响。通过单因子试验和正交设计试验,得出了发酵液体培养的最佳条件:当培养时间96h、初始pH值为6.5、发酵温度31℃、碳源浓度2%、氮源浓度2%、金属离子浓度0.01mol/L、接种量6%,所产甲壳素脱乙酰酶的酶活达到13.68U/mL。本课题还研究
9、甲壳素脱乙酰酶高产菌株的筛选、发酵及酶学基本性质研究
甲壳素脱乙酰酶是催化甲壳素转变为壳聚糖的重要生产酶,它通过催化N-乙酰氨基-D-葡萄糖胺脱去乙酰基将甲壳素转变为壳聚糖,其主要存在于结合菌纲的真菌中。利用它代替现在普遍采用的浓碱热解法生产壳聚糖,这既可以解决目前壳聚糖生产中的环境污染问题,又可以生产出高质量的壳聚糖产品。本论文从自然环境中筛选到甲壳素脱乙酰酶高产细菌 Z7。并对该菌株进行了产酶发酵条件优化及酶学基本性质研究,为以后的甲壳素脱乙酰酶工业化生产奠定了良好的基础。研究结果如下:(1)甲壳素脱乙酰酶高产菌株筛选鉴定。本研究利用对硝基-N-乙酰苯胺为显色剂,从河滩、海滩以及虾蟹加工厂废墟的土壤中筛选到产甲壳素脱乙酰酶菌株36株,根据显色能力的差异筛选到产甲壳素脱乙酰酶能力较强的
10、壳聚糖酶的制备及应用
目前市场上大多数壳寡糖生产仍然采用酸降解或氧化降解方法,其生产工艺复杂,对环境污染大,产品分子量大,溶解性和生物活性低。而酶解法反应条件温和、整个降解过程中无其他反应试剂的加入、不至于发生其它副反应、降解过程及降解产物相对分子质量分布易于控制、壳寡糖得率高、不造成环境污染。本研究所用的高产壳聚糖酶的微生物菌株是从自然界中分离筛选出的,经过鉴定为蜡样芽孢杆菌SHS-0903,提取此菌种壳聚糖酶基因,连接到原核表达载体pET28a上,以大肠杆菌BL21为宿主转化表达,获得了工程菌,并对其发酵产酶条件进行优化,研究确定其最适产酶培养基。在此培养条件下,经过破壁离心后的壳聚糖酶活力可达到1500U/m L。发酵粗酶液经离心,20%-70%硫酸铵盐析后经浓缩得到壳
11、离子液体下酶解壳聚糖制备甲壳低聚糖反应研究
12、酶法生产壳寡糖及其质量控制研究
13、酶法制备甲壳低聚糖
14、强制渗透法制备水溶性壳聚糖及其固定化酶解方法与产物研究
15、生物酶降解壳聚糖及其应用研究
16、氧化法预处理酶法制备壳寡糖的工艺研究
17、鱿鱼骨壳聚糖的制备及性质研究
18、02138647.1A 一种用酶水解法从蝇蛆中提取蛋白质和甲壳素及用甲壳素制备壳聚糖的方法 1-10
19、03112619.7A 一种甲壳低聚糖的制备方法及应用 1-12
20、200610035537.7A 一种甲壳素、壳聚糖的制备方法 1-7
21、200710107079.8A 一种从蚕蛹、蝇蛆的皮壳中制取甲壳素 壳聚糖的方法 1-18
22、200710152160.8A 一种制备甲壳素及其壳聚糖和壳寡糖的方法 1-20
23、200910043062.XA 一种高产甲壳素脱乙酰酶的解淀粉芽孢杆菌csuftF14及其应用 1-8
24、200910054879.7A 甲壳素脱乙酰酶的生物制备方法 1-16
25、201010135626.5A 一种蝇蛆甲壳素、壳聚糖的制备工艺及其在诱导深绿木酶T2菌株产生几丁质酶中的应用 1-14
26、201210134963.1A 一种制备甲壳素脱乙酰酶的方法 1-6
27、201210502403.7A 一种蝇蛆甲壳素、壳聚糖的制备工艺 1-14
28、201310329647.4A 一种生物催化的高效农业壳寡糖的生产方法 1-6
29、201310475664.9A 一种用微生物发酵生产甲壳低聚糖的方法 1-17
30、201410600320.0A 一种超声波协同CDA酶制备龙虾壳壳聚糖的方法 1-6
31、201510881148.5A 一种蝇蛆壳聚糖的制备方法 1-7
32、201511009052.6A 一种自制酶液生产壳寡糖的方法 1-6
33、201610050281.0A 一种几丁聚糖的制备方法 1-8
34、201610507157.2A 一种以虾蟹壳为原料制备中度脱乙酰水溶性甲壳素的方法 1-13
35、201610671530.8A 一种功能性壳寡糖的联合生产方法 1-5
36、201610678547.6A 一种壳聚糖的制备方法 1-6
37、201610936455.3A 一种利用虾废料同时制取虾青素、壳聚糖的方法 1-7
38、201710095144.3A 一种壳聚糖的提取和制备方法 1-7
39、201710121564.4A 一种将甲壳素制备成壳寡糖的方法 1-6
40、201710788510.3A 一种节能环保甲壳素脱乙酰加工方法 1-8
41、产甲壳素脱乙酰酶霉菌A4菌株的筛选和鉴定
42、低分子量壳聚糖的制备及其应用研究
43、甲壳低聚糖酶法制备工艺的优化
44、甲壳素／壳聚糖在酶固定化中的应用
45、甲壳素及其衍生物的制备与抑菌活性研究
46、甲壳素生物脱乙酰技术研究现状
47、甲壳素脱乙酰酶的研究概况及应用展望
48、甲壳素脱乙酰酶在壳聚糖制备中的应用进展
49、甲壳素脱乙酰酶作用机理及基因表达的研究进展
50、甲壳素研究和应用
51、壳寡糖的酶法制备
52、壳寡糖的酶法制备及应用研究进展
53、壳聚糖酶制备壳寡糖的研究与应用
54、酶法改性壳聚糖的研究进展
55、酶法生产低聚糖
56、酶法制备甲壳低聚糖研究的进展
57、酶法制备甲壳素系列衍生物的研究进展
58、酶法制备壳低聚糖的工艺研究
59、酶技术在功能性低聚糖生产中的应用
60、酶在壳聚糖制备中的应用
61、生物法制备壳聚糖的研究进展
62、虾壳甲壳素及壳聚糖提取工艺的研究
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